青岛九洲盛邦生物科技有限公司活菌检测方法

一、培氧基的组成：　
1、 枯草芽孢杆菌（蜡样芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌）培养基：
牛肉膏　 3克
氯化钠　 5克
蛋白胨　 10克
琼脂　　 20克
蒸馏水　 1000毫升
PH　　　　7.0
121．C灭菌30分钟。
2、 啤酒酵母培养基：
大麦芽粉　　300克
蒸馏水　　　1000毫升
保温60。C，大麦芽粉自行糖化至液体中无淀粉反应为止，加水至糖度为10~15波林，再加入2%琼脂，121．C灭菌30分钟。
3、　植物乳酸杆菌培养基：
　在啤酒酵母培养基中加入10%轻质碳酸钙和5%番茄汁，121．C灭菌30分钟。
二、样品的准备：采样应不少于500g，从中称取10g（精确到0.01g），加入带玻璃珠的盛有100ml无菌水的三角瓶中，在旋转式摇床上200r/min充分震荡30min,静止片刻待用。
三、样品的稀释：用无菌吸管吸取1ml上述菌悬液加入盛有9ml无菌水的试管中，混匀成1：10的稀释的菌悬液。这样依次稀释，分别得到1：100、1：1000等稀释度（每个稀释度必须更换无菌吸管）
四、测定：用1ml无菌吸管分别吸取不同稀释度菌悬液0.1ml，加至直径9cm平皿的营养琼脂培养基表面，用无菌玻璃刮刀将菌悬液均匀地涂于琼脂表面。或取1ml不同稀释度菌悬液加入培养皿内，与营养琼脂培养基混匀。每个样品取3个连续适宜稀释度，每一稀释度重复3次，同时用无菌水作为空白对照，枯草芽孢杆菌（蜡样芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌）培养基倒置于37~40。C培养箱中培养24小时，植物乳酸杆菌培养基倒置于37~40．C培养箱中培养2~5天，啤酒酵母培养基倒置于28~30．C培养箱中培养1~2天。
五、菌落计数
1、 以平板上出现的30~300个菌落数的稀释度平板为计数标准。
2、 当只有一个稀释度，其平均菌落在30~300之间时，则以该菌落数乘以其稀释倍数。
3、 若有两个稀释度，其平均菌落均在30~300之间，应按两者菌落总数之比值来决定，若其比例小于2，应计数两者的平均数；若大于2则计数其中稀释度高的平均菌落数。
4、 若三个稀释度的平均菌落数均大于300，则计数稀释度高的平均菌落数。
5、 若三个稀释度的平均菌落数均不在30~300之间，则以接近30或300的平皿计算活菌数。
6、 同一稀释度三个平皿上菌落平均数。
根据下式计算：
样品含菌数=菌落平均数×菌悬液体积×稀释倍数
注：严格检测，需观察各菌落形态、颜色，挑取单个菌落进行显微镜检测，才能完全确定。
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